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1. Carrier RNA概念及作用
荧光定量PCR是分子诊断主流技术,包括核酸提取和PCR扩增两个环节,两者共同决定了该检测方法的评测参数。以最直观最关键的检测灵敏度指标来看,只有实现了提取环节最优化和PCR扩增环节最优化的情况下,检测灵敏度的结果才更可信。检测灵敏度显示了检测试剂的检测下限,对于荧光定量PCR而言,即一定样本浓度下的病毒核酸检出率。
Carrier RNA,中文名载体RNA,又叫核酸助沉剂。在核酸提取环节,提取使用到的离心管壁多是聚丙烯的材料,管壁上有静电,会吸附核酸。在提取纯化过程中采用Carrier RNA 可帮助核酸去除静电效应,保证核酸能很好被吸附到纯化柱上,提高洗脱效率,从而达到尽可能多的回收样本中核酸!
2. Carrier RNA常见类型
作为核酸沉淀的辅助物质,Carrier RNA有多种类型。
类型
代表物质
作用原理
多聚糖
糖原
RNA在高盐、无水乙醇环境中溶解度很低,通过高速离心可发生沉淀。当RNA浓度很低时,微量RNA不足以形成沉淀。在上述环境条件下,糖原也不可溶并可与RNA共沉淀,形成可视化沉淀。
核酸混合物
PolyA钾盐、大肠杆菌总RNA、酵母总RNA、tRNA等
减少吸附损失,降低核酸酶攻击待提取核酸的概率。
其他
线性化丙烯酰胺
减少吸附损失
3. 产品介绍——上海翌圣生物生产的Carrier RNA
翌圣生物Carrier RNA是酵母来源的RNA,无DNase、RNase酶残留,蛋白和DNA残留含量极低。可用于病毒核酸提取、微量DNA提取等实验,提取的核酸可用于后续RT-PCR,RT-qPCR等实验。产品分为液体和冻干型粉末制剂,便于直接使用和长距离运输、保存。
产品名称
产品编号
规格
保存条件
Carrier RNA, 6 μg/μL
19701ES03
1 mL
-20℃保存,可保存2年
Carrier RNA Powder, 216 μg/tube
19703ES01
1 tube
室温保存,可保存1年
Carrier RNA Powder, 310 μg/tube
19704ES01
1 tube
室温保存,可保存1年
本品为核酸混合物,产品使用非常简单,在纯化核酸过程中通过添加微克量(μg)的Carrier RNA,即可实现提升低至皮克级别(pg)微量核酸的沉淀效率,达到提升试剂检测灵敏度的目的。
其作用原理主要是通过混入大量核酸(Carrier RNA),减少了目标核酸物质的管壁吸附损失,进而提高微量的核酸纯化柱上的结合和洗脱效率,同时降低了提取环境中的RNase降解微量RNA的概率。
4. 应用案例
● Carrier RNA的加入有助于低丰度SARS-CoV-2假病毒核酸检测
使用磁珠法拭子样本病毒DNA/RNA提取试剂盒,提取不同浓度的SARS-CoV-2假病毒样本核酸,后续使用新 冠检测试剂盒进行检测N基因。结果显示,添加Carrier RNA后,具有更高的提取效率,使下游检测更灵敏。
Ct值
0 copies/mL
125 copies/mL
250 copies/mL
500 copies/mL
1000 copies/mL
NTC
不加carrier RNA
N/A; N/A; N/A
N/A; N/A; N/A
N/A; 40.4; N/A
N/A; 40.16; 40.88
38.05; 38.02
N/A; N/A; N/A
加carrier RNA
N/A; N/A; N/A
N/A; 40.54; N/A
40.2; 40.29; 38.95
38.61; 39.03; 38.59
37.53; 36.34
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