NGS，或者是二代测序（当然还有三代测序、四代测序）这几个词，相信大家就算未接触过，也已经听过，NGS到底是做什么呢？或者说，NGS到底研究的是什么？在这里，我们来详细讲解讲解吧。

二代测序相关的技术可以分为三大类，DNA研究相关技术、RNA研究相关技术和表观研究相关技术（我们主要来给大家讲述下二代测序相关的技术，谁让目前属二代测序相关技术及应用最多呢）。

图：NGS测序图鉴
 

1、DNA研究相关技术

DNA相关研究技术主要步骤离不开：DNA提取、DNA片段化、DNA文库构建、测序和数据分析。

看起来，DNA相关研究技术操作步骤似乎没有那么难，那么，如果你觉得DNA研究很简单的话，那你就真是too young too simple啦。

首先，DNA研究相关技术里，全基因组测序WGS是逃脱不开的技术，从人类基因组计划实施完成之后，人类开始进入了基因组时代，不同物种的基因组信息被相继报道，关于基因组的生信分析手段也层出不穷，要来讲基因组的故事，可能得讲述个“两三百年”了，所以这里，我们就不去赘述它。但是大家要知道，所有的关于二代测序研究，在进入这个领域之前，我们还是要去确认下所要研究的物种是否有基因组，当然了，这里可能会有些杠精默默吐槽，无参分析现在都可以做的。嗯，我知道啊，但是无参分析从来也只是不得已而为之，在有参考序列时，尽量选择用有参的方式进行数据分析。

在基因组测序上，还有全基因组重测序和简化基因组测序，这类技术目前主要应用与构建遗传图谱、种质资源鉴定、动植物遗传育种、结构变异检测、性状基因定位和群体进化分析等，衍生了一些分析的专有名称如BSA、SNP、Indel、SV、QTL、GWAS等，都是在根据不同的样本数量及分析需求进行调整。除此之外，还有一些做环境样本如土壤、粪便、肠道和水体等或者病原样本的宏基因组的，也是基于单个样本基因组研究技术发展起来的。当然，还有一些基于群体的但是研究的是某个或者某些基因部分序列的技术如DNA条形码、宏条形码等或者是16S/18S/ITS测序、功能基因组测序、食性分析等扩增子测序。
 

产品定位

产品名称

产品货号

规格

机械法建库

Hieff NGS® Ultima DNA Library Prep Kit for Illumina®

12199ES24/96

24/96 T

Hieff NGS® Ultima Pro DNA Library Prep Kit for Illumina®

12201ES24/96

24/96 T

酶切法建库

Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit for Illumina®

12205ES24/96

24/96 T

机械法建库

Hieff NGS® Ultima Pro DNA Library Prep Kit for MGI®

13311ES16/96

16/96 T

酶切法建库

Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit for MGI®

13322ES16/96

16/96 T

2、RNA研究相关技术
 

RNA相关研究技术的主要步骤也是一样，离不开RNA提取、ｍRNA捕获（ｒRNA去除）、RNA文库构建、测序和数据分析。

RNA研究目前主要的研究对象是ｍRNA、miRNA、circRNA、lncRNA以及tRNA。根据研究对象的特性，建库的方法也不相同。比如mRNA有polyA尾，所以使用oligo dT beads捕获ployA；而miRNA因为片段较小，通常用非变性胶跑胶检测后切胶回收，circRNA建库分两种情况，一种是只构建circRNA的文库，这种时候，需要先去除线性化的RNA，再来构建circRNA的文库，当然，还有另外一种就是用去除rRNA的方式构建lncRNA文库，这样既能够得到mRNA信息、lncRNA的信息，还能得到部分circRNA；研究tRNA呢，得特异性捕获tRNA得发夹结构，然后加上去甲基化得步骤，之后构建tRNA文库。
 

在这里，要来讲一个特殊的转录组研究，就是单细胞RNA-seq，单个细胞因为RNA量少，使用常规的建库方法通常容易失败。这时，我们需要让整个实验尽量在一管中实验，而不是常规的需要在整个实验流程中需要不断的更换EP管。目前，大多采用的是磁珠来实现一管操作。因为建库时，通常构建的是mRNA文库。